分子互作研究工作方法之蛋白互作（一）

蛋白互作（PPIs）是一项基本的细胞事件，它发生在亚细胞结构和细胞器的每一个生理操作过程里面，说明细胞内的交互作用在何时、何地发生以及细胞内复合物如何产生为确定细胞内生物化学功能透过了重要基石。归纳蛋白互作的步骤大多，后面一起来知晓一下可在所谓素质上下定义PPIs的研究课题步骤。

亲和纯化及抗体共沉淀 亲和纯化(AP)是监测细胞内交互作用的一种简单而理论上的步骤。诱饵蛋白与多种形式基质共价偶联或以非共价但高度亲和的方式将相互连接，例如通过常用吸附理应的抗体或通过成对的丝氨酸-链霉亲和的方式将。蛋白提取物通过基质后，只有与诱饵蛋白交互作用的蛋白被存留，随后在高盐有条件下转入洗涤剂后被洗脱。然而，需要特别注意的是，这种交互作用或许在体内极为假定，只是在实验有条件下产生。

抗体共沉淀原理也类似，将特定的蛋白-抗体复合物加到细胞裂解液里面。在抗体沉淀后，任何与蛋白产生复合物的细胞内都被洗脱并大幅度利用质谱鉴定。

优点：高成本；样品消耗高；不需要大型基石设施；很弱或瞬态PPIs可通过体外监测；无须标签。

缺点：高背景；高敏感性；高灵活性交互作用的监测需要大量的诱饵蛋白。

上图1. AP操作过程示意上图

酵母菌双杂交实验 酵母菌双杂（Y2H）是一种基于功能磷酸化q重构的PPIs活体监测步骤，该磷酸化q可以触发酵母菌核糖体里面标记等位基因的磷酸化。该系统对是将待研究课题的两种细胞内分别奎尔（混合）到酵母菌表示质粒的磷酸化诱导q（如GAL4等）的DNA混合位点（DNA-BD）和磷酸化诱导域（AD）上，协作成混合表示多种形式，从表示产物归纳两种细胞内交互作用的系统对，蛋白之间的交互作用通过β-甘氨酸的活性来监测。

优点：高吞吐量；样品消耗量高。

缺点：难以浮现假阳性；需要一些特定的器材。

上图2. Y2H操作过程示意上图

（Syafrizayanti, Betzen C , et al. Expert Review of Proteomics, 2014.）

安徽精神心理治疗哪家好
江苏皮肤病挂号
云南妇科医院哪家正规
北京看妇科去什么医院好
漳州白癜风检查多少钱
阴囊胀痛
减肥瘦腰
急支糖浆有什么作用
科普文章
医学科普知识